Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展平稳的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身免疫到用到1HG冠心病诊疗征状的重大突破率在婴幼儿时期就有不错的说明了，多个胰脏自身免疫乙型肝炎的婴幼儿中会有70%在血清转换后10周内患有冠心病，而随访15年的婴幼儿这一比率缩减到84%。相比来说之下，占诊疗1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的复发机制还并未给与充分的科学研究。

越来越多的人开始用于分期系统来并不一定1HG冠心病的重大突破：个本体在用到多种胰脏自身免疫时进到第1阶段，用到血压异常时进到第2阶段，用到征状时进到第3阶段。一些多发胰脏自身免疫乙型肝炎的个本体，在1期和2期，重大突破更较慢，并发展为复发的1HG冠心病。我们以后说明了了一四组在首次扫描到多种胰脏自身免疫抽样后至少10年无冠心病的极较慢重大突破者，这四组患儿人数少，但基本特征十分明确。随后，我们推测胰脏自身抗体免疫CD8+T细胞内反不宜在重大突破较较慢的患儿中会基本不实际上，但在更进一步复发和长期实际上的冠心病患儿中会很不易扫描到。这可能指显露，与重大突破患儿相比来说，这些患儿自身免疫反不宜的调节增强。

20世纪科学研究指显露，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但冠心病患儿实际上一些机能不足之处，其中会包括对IL-2的反不宜意志力降低。此外，冠心病患儿中会的不稳定性CD4+T细胞内可能对调节突显抵抗性，本体现为不稳定性T细胞内的抑制作用西移动，自然诱发的Treg和本体外诱发的游离Treg，以及抗体境况的CD4+T细胞内中会IL-2反不宜西移动。本科学研究的目地是说明了了CD4+调节性T细胞内(Treg)在海岸边极较较慢重大突破者中会的基本特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群相结合的两端科学研究，在21岁不限确诊的患儿亲属中会体检1HG冠心病的危险环境因素。我们以后说明了了长期较较慢重大突破者的基本特征，他们保持一致多重胰脏自身免疫乙型肝炎超过10年，但并未用到冠心病的诊疗征状，较慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续保持一致无冠心病并主动提供大量血液抽样的较较慢重大突破者纳入T和B细胞内机能深入研究。在目前的科学研究中会，8名较慢重大突破者(SP四组)，中会位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身免疫乙型肝炎。所有的四组织者都东南面1HG冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身免疫对某些抗体的乙型肝炎，然而，一名患儿已经东南面2期至少6年，但并未用到诊疗征状，一名患儿被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中会对该NAD进行时了除此以外评核。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多变量流式细胞内练成和T细胞内抑制作用次测试评核NAD中会Treg的振幅、表HG和机能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)进行时无统筹聚类深入研究，评核Treg表HG。

结果：与有益NAD相比来说，来自较慢重大突破本体的梦境CD4+T细胞内的统筹聚类指显露，激能活的梦境CD4+ Treg振幅缩减，与糖皮质激素游离的TNFR关的蛋白质(GITR)表述缩减有关。一名HbA1c下降的患儿与重大突破较较慢者和匹配的相比较四组相比来说，Treg可知相同。机能最近，与有益NAD相比来说，来自较较慢重大突破本体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞内抑制作用明显破损。本体现为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134表述的抑制作用缩减。

上图1 险恶的表HG深入研究指显露，CD4+Treg亚HG在较慢重大突破队列中会缩减。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NAD的能活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物表述比对显露10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用于9个不同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，巨大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点四组一处上色。每个节点中会的饼上图透露单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以指显露整本体上面表述。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解上图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比原子量为每个metacluster箱弟直通上图(原子量> 0.05%)确切为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。浅白色左上角值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用于CITRUS的预测模HG确认，Treg振幅的缩减是重大突破较较慢的标志。基准奈斯(a - f)和油菜深入研究(g-k)非常SP四组织者和匹配的HD四组织者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群本体的值得一提的是性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述进行时分离，模拟FlowSOM社会群本体。(b) HD(外缘)和SP(蓝点)四组以及NADSP 606(浅白色)中会CD25+ cd127的振幅概要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯弟集的箱弟直通上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)油菜簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度上色，箭头引人注目的簇被定位为SP和HD队列之间的不同。(j)箱弟直通上图指显露了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比原子量(比率)。(k)直方上图指显露每个簇的表HG(深蓝色)和Treg上面相比表述与背景表述(白色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

上图3 与有益献血者相比来说，重大突破较较慢者梦境treg的GITR缩减。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热上图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(浅白色)的FlowSOM GITR表述串联，指显露直方上图(c)和概要上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(浅白色)所有NAD包括，p< 0.05(白色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从基准奈斯，从所有HD(棕色)、所有SP(白色)和SP 606(浅白色)串联，指显露直方上图(e)和概要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

上图4 来自较较慢重大突破的CD4+ treg细胞内控制不稳定性CD4+T细胞内的意志力降低。SP四组用白色的直通和左上角透露，HD四组用黑色的直通和左上角透露，浅白色的直通/左上角透露NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(此番者)被上面为CFSE, Treg按检视的比率试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞内，人才培养3过后进行时流式细胞内练成扫描。(a-d)与CD4+此番者相比不宜的treg人才培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用一般而言。用于乙型肝炎相比较(激能活的积极响不宜细胞内不含treg)计数抑制作用一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

上图5 不稳定性CD4+T细胞内对较较慢重大突破的T细胞内还原的抑制作用更敏感性。SP四组用白色的直通和左上角透露，HD四组用黑色的直通和左上角透露，浅白色的直通/左上角透露NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel上面，treg按检视的比率试样。用抗CD3 /28微珠还原细胞内，人才培养3过后进行时流式细胞内练成(CD25反染)和细胞内因弟深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分比(b)。(c,d) CD25抑制作用百分比(c)和CD134抑制作用百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论点：我们得显露的论点是，来自较较慢重大突破弟的还原梦境CD4+Treg在GITR表述中会给与了适配和非常丰富，务实了进一步科学研究Treg在1HG冠心病风险个本体中会的异质性的重要性。

显露处记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28