Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日益扩展

从第一次用到胰脏自身免疫到用到1型号哮喘外科症状的重大突破赴援在成人中期就有很好的阐述，多个胰脏自身免疫无症状的成人中会有70%在血浆变换后10天内肺结核哮喘，而随访15年的成人这一分之一减低到84%。相比较较，分之一外科1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的发作机制还未取得更促使的侧重研究。

越发多的人开始运用于分段系统来假设1型号哮喘的重大突破：个体在用到多种胰脏自身免疫时转回第1过渡期，用到食欲反常时转回第2过渡期，用到症状时转回第3过渡期。一些多发胰脏自身免疫无症状的个体，在1期和2期，重大突破较更慢，并其发展为发作的1型号哮喘。我们之前阐述了一组在首次样品到多种胰脏自身免疫检验后至少10年无哮喘的亦非更慢重大突破者，这组患儿人数少，但外观上更加明确。随后，我们断定胰脏自身免疫依赖性CD8+T两条路线粒体催化在重大突破亦非快的患儿中会整体不普遍存在，但在近期发作和起因于的哮喘患儿中会很容易样品到。这可能说明，与重大突破患儿相比较，这些患儿自身免疫催化的调节强化。

早期侧重研究说明，尽管调节性T两条路线粒体(Treg)数量也就是说，但哮喘患儿普遍存在一些功用局限性，其中会最主要对IL-2的催化能力提高。此外，哮喘患儿中会的畸变CD4+T两条路线粒体可能对调节更具抵抗性，观感为畸变T两条路线粒体的消除西移动，自然导致的Treg和体外导致的可借Treg，以及免疫经历的CD4+T两条路线粒体中会IL-2催化西移动。本侧重研究的借以是阐述了CD4+调节性T两条路线粒体(Treg)在海岸边亦非亦非快重大突破者中会的外观上，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX侧重研究是一项以人群为基础的纵向侧重研究，在21岁以下发作的患儿亲属中会检查1型号哮喘的危险因素。我们之前阐述了近十年亦非快重大突破者的外观上，他们保持稳定多重胰脏自身免疫无症状少于10年，但未用到哮喘的外科症状，更慢性或非顺利癫痫自身免疫。随后，10名继续保持稳定无哮喘并愿意提供大量血液检验的亦非快重大突破者归入T和B两条路线粒体功用归纳。在现有的侧重研究中会，8名更慢重大突破者(SP组)，中会位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身免疫无症状。所有的组织者都处于1型号哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后一落千丈了胰脏自身免疫对某些免疫的尿检，然而，一名患儿已经处于2期至少6年，但未用到外科症状，一名患儿被诊断为哮喘，该受试者72岁，在挖掘实验室检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中会对该丝氨酸顺利进行了另行指标。分开外周血单个核两条路线粒体(PBMCs)，采用多参数流式两条路线粒体忍术和T两条路线粒体消除试验指标丝氨酸中会Treg的频谱、特异性号和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类归纳，指标Treg特异性号。

结果：与身体健康丝氨酸相比较，来自更慢重大突破体的思绪CD4+T两条路线粒体的监督聚类推测，激活的思绪CD4+ Treg频谱减低，与糖皮质激素可借的TNFR方面亚基(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的患儿与重大突破亦非快者和比如说的解读组相比较，Treg谱有所不同。功用归纳说明，与身体健康丝氨酸相比较，来自亦非快重大突破体的Treg依赖性的CD4+畸变T两条路线粒体消除明显损伤。观感为对畸变CD4+T两条路线粒体CD25和CD134传达的消除减低。

平面图1 侧重的特异性号归纳推测，CD4+Treg流感病毒号在更慢重大突破路由表中会减低。由FlowSOM分解的Treg房，群聚在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -两条路线粒体上。根据标上物传达鉴定出10个元簇:思绪T两条路线粒体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒体;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标上分解的10个元簇的MST。每个结点推选一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在结点组周围上色。每个结点中会的碗平面图透露单个标上的传达层次。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整体标上传达。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装有两条路线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒体(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T两条路线粒体(l)。浅粉红色左上角推选慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模型号证实，Treg频谱的减低是重大突破亦非快的标志。分级旁路(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP组织者和比如说的HD组织者在CD4+CD45RA−T两条路线粒体上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的推选性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分开，各种类型号FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)组以及丝氨酸SP 606(浅粉红色)中会CD25+ cd127的频谱汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的装有两条路线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达准确度着色，圆圈突出的簇被识别为SP和HD路由表二者之间的不同。(j)装有两条路线平面图推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(分之一)。(k)直方平面图推测每个簇的特异性号(粉红色)和Treg标上一般来说传达与历史背景传达(粉红色);上列，闪存Treg_3;示意图一行，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇中会标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取字母秩检验

平面图3 与身体健康献血者相比较，重大突破亦非快者思绪treg的GITR减低。每个思绪CD4+T两条路线粒体元簇(思绪T两条路线粒体_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T两条路线粒体;HLA-DR + GITR +思绪T两条路线粒体;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个传达标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热平面图(sp606不最主要在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)的FlowSOM GITR传达联接，推测直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon选取字母秩和检验，p< 0.07(浅粉红色)所有丝氨酸最主要，p< 0.05(粉红色)丝氨酸SP 606和比如说的HD不最主要在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)联接，推测直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取字母秩检验

平面图4 来自亦非快重大突破的CD4+ treg两条路线粒体操控畸变CD4+T两条路线粒体的能力提高。SP组用粉红色的两条路线和左上角透露，HD组用白色的两条路线和左上角透露，浅粉红色的两条路线/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按掩蔽的分之一起始。用抗CD3 /28微珠转化两条路线粒体，人才培养3同一天顺利进行流式两条路线粒体忍术样品。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg人才培养(可借)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除一般而言。运用于无症状解读(激活的响应两条路线粒体不含treg)计算消除一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 畸变CD4+T两条路线粒体对亦非快重大突破的T两条路线粒体转化的消除更敏感。SP组用粉红色的两条路线和左上角透露，HD组用白色的两条路线和左上角透露，浅粉红色的两条路线/左上角透露丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T两条路线粒体顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按掩蔽的分之一起始。用抗CD3 /28微珠转化两条路线粒体，人才培养3同一天顺利进行流式两条路线粒体忍术(CD25反染)和两条路线粒体因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除次之(b)。(c,d) CD25消除次之(c)和CD134消除次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们事实的事实是，来自亦非快重大突破子的转化思绪CD4+Treg在GITR传达中会取得了扩展和丰富，合理化了促使侧重研究Treg在1型号哮喘危险性个体中会的关联性的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28